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123仪器商城教你如何制备色谱

2010-12-23

123仪器商城教你如何制备色谱
制备型色谱是在分析型色谱的基础上建立起来的，是一个从量变到质变的过程。广义讲所有不同类型的色谱都能转成制备型色谱，从制备规模和产值利润考虑，制备型液相色谱当属优选的方法。
以中药制药为例。在确定了药物的有效性后在分析型色谱的基础上逐步发展成制备型色谱。
在研发阶段先用小型的制备色谱制备mg级试样供有效组分或有效部位的理化性质的研究和化学结构的分析。
从分析型到制备型液相色谱表现在样品进样量放大。与此相适应：（1）泵流量、色谱柱长和柱内径相应放大；（2）填料的填装量放大到几百克到几十千克，甚至上百千克，填料粒度达40—80um；（3）流动相组成和检测器参数也要做相应的修改。
市场上出售的制备色谱柱尺寸规格还有更大的，填料硅胶C4、C8、C18、氰基、醇基等键合相。
杂质常与被纯化的组分混在一起，可用以下几种流程分步地将杂质和被纯化的组分分开。
1、分段收集被子色谱柱分离了的组分按检测器监测的色谱峰收集。在检测器的出口接一个组分收集切换阀，一个组分收集完毕后转动切换阀到另一个收集品收集流出液，可以多次进样，同一个组分收集在一起。选择有效组分的收集液经浓缩、洗涤、净化即可得到粗产品，弃去杂质和其它元用组分的收集液。能实施分段收集的首要条件是有效组分色谱峰无其它色谱峰的干扰。
2、重复制备多数情况下被纯化的组分常与杂质纠缠在一起，不适宜用分段收集法。重复制备是简单的方法。第1次制备收集到的有效组分洗脱液经浓缩后进行第2次制备，第1次制备可除去部分杂质；第2次制备收集到的有效组分洗脱液经浓缩后进行第3次制备，第2次制备已除去大部分杂质；第3次制备……
第一次制备收集到大量的洗脱液，必须浓缩后才能进行下一次的制备，溶剂的消耗大，产率不高。
3、循环制备再循环系统由一个制备量泵、一个进样器、一个六通阀、两根制备色谱柱、两个检测器组成。连接方法：样品进入系统后，先经柱1和检测池1（六通阀实线相通），继而进入柱2，等所有的组分完全通过检测池2后，转动六通阀（六通阀虚线相通），使柱2的洗脱液再导入柱1，这相当于第三次循环，直到分离效果满意为止再收集。
这种循环完全在密封系统中进行，不涉及到柱外扩散的死体积，分离效果尚好。但每次循环通过柱1和柱2的流动相方向都相同，色谱峰会自动扩散变宽。
4、反冲制备前面已介绍过反冲技术，此处介绍如何应用反冲技术制备纯化有效组分。在制备的样品中含有保留很强的杂质或组分，可选用反冲制备方法。不需要反复循环，流程一次循环可制备完毕。
这种制备方式只要1台泵，1个进样器，1个检测器，两根色谱柱。增加1个六通的切换阀，1个五通的反冲阀（可用六通阀代替）。进样后样品随着流动相沿实线（→）由柱1经反冲阀到柱2，经切换阀再回到反冲阀，从检测器的监测中弃去杂质、收集有效组分后立即同时转动反冲阀和切换阀。此时流动相没图中的虚线（→）首先进入反冲阀，再反相流经柱1经切换阀后反相流经柱2，后从检测器流出，后去掉保留很强的杂质，或者洗脱保留很强的组分。
通过反冲流动相先后两次以不同的方向进入1和2柱。反冲前可去掉干扰有效组分的杂质，并收集有效组分，反冲后那些保留很强的杂质或组分以相同的速度从原路返回，后流出检测器。整个流程节约了大量因洗脱强保留杂质和组分消耗掉的流动相。